原生质体培养的现状是怎样的？

自20世纪60年代酶法分离原生质体取得成功以来，植物原生质体研究发展迅速。果树原生质体分离和培养研究起步较晚，我国20世纪80年代开始研究苹果的原生质体培养，丁爱萍等利用新红星等苹果胚珠诱导愈伤组织，并建立悬浮细胞系进行原生质体培养，获得了原生质再生植株。

但再生基因型相对于丰富的苹果属资源还非常有限，再生体系之间存在很大差异。潘增光等（1986）以悬浮培养细胞及叶片作为分离原生质体的起始材料，对影响苹果原生质体分离和培养的因素进行了系统研究，获得了平邑甜茶、Msubscript26subscript、嘎拉3种基因型的原生质体再生植株。到目前为止，在苹果原生质体技术研究中，从原生质体的分离到愈伤组织的形成已无太大障碍，而最关键的问题是愈伤组织分化再生植株较为困难，它是制约苹果原生质体广泛应用的瓶颈。至今只有12种苹果基因型原生质体再生植株，其中主要是实生苗和砧木，真正的苹果品种还很少，即使在这些再生材料中，再生频率也很低，还很难判断影响因素的作用效果。有关原生质体技术的研究资料尚不充分，无规律可循。

要提高原生质体愈伤组织再生频率，一方面要进行多种基因型材料的实验，另一方面找到一个再生频率较高的模式材料进行深入研究，以此带动整个苹果原生质体技术的发展。葡萄的原生质体培养难度较大。从1974年开始，涉及的基因型超过20种，大多数只形成小细胞团及愈伤组织，直到1990年才从欧洲葡萄Cabernet：Sauvignon悬浮细胞来源的原生质体再生了植株，1997年Zhu利用叶片诱导的胚性愈伤组织分离原生质体获得再生植株，1999年于向荣以葡萄花丝诱导胚性愈伤组织分离原生质体并获再生植株，这些研究中多采用葡萄野生种，极少以栽培品种作为材料，因此，目前葡萄原生质体分离和培养尚未形成完善的技术体系，仍具有偶然性。

1991年，Tao等以次郎柿叶片愈伤组织为材料分离柿原生质体，进行原生质体培养获得了再生植株。1993年，Tamura等通过改进原生质体培养方法，使用改良KM8P培养基，采用低密度原生质体培养，获得了高频再生植株。并对这些再生植株进行了磷酸葡萄糖异构酶（GPI）、磷酸葡萄糖变位酶（PGM）和苹果酸脱氢酶（MDH）的同工酶带型分析，认为与来自休眠芽再生植株上述酶的同工酶带型无差异，而在幼叶颜色上有差异。草莓原生质体培养始于20世纪80年代中后期，已成功获得原生质体再生植株，但相关报道很少，起始材料单一，多为试管苗幼叶或叶柄。张学英（2004）利用草莓花药愈伤组织的悬浮系做起始材料成功培养出了再生植株。

其他果树的原生质体研究也有报道。马锋旺对影响山杏、中国李原生质体分离和培养的因素进行了系统研究，从山杏原生质体培养获得了再生植株，为细胞融合及遗传转化提供了再生系统。何业华等（1999）以无核小枣和鸡蛋枣的芽胚性悬浮细胞为材料，成功获得完整的原生质体再生植株。王义强等（2003）对银杏等果树的原生质体培养研究也有报道。猕猴桃属植物原生质体培养的相关报道较多，美味猕猴桃、中华猕猴桃等原生质体培养技术已相当完善。荔枝、红河橙、柿、西洋梨、柑橘等也有研究。总之，迄今果树原生质体培养涉及的基因较少，原生质体来源也较局限，原生质体分离和培养的影响因素研究还处于不断探索之中。